l 技術(shù)簡介

荷蘭U-CyTech公司是很早從事無血清ELISPOT檢測技術(shù)研究并且取得卓越成果的公司之一。值得驕傲的是達(dá)科為公司也參與了U-CyTech的很大一部分研究工作，獲得了聯(lián)合的知識(shí)產(chǎn)權(quán)。達(dá)科為公司獲得授權(quán)，于2006年開始在國內(nèi)生產(chǎn)達(dá)優(yōu)?無血清培養(yǎng)基。

由于涉及到專利的問題，這里只對(duì)無血清ELISPOT檢測技術(shù)作一個(gè)簡單的介紹。通俗地說，就是知道血清中維持淋巴細(xì)胞活力所必需的成分后（包括營養(yǎng)代謝成分、細(xì)胞信號(hào)成分和多種生長因子），把它們做成原料，添加到空白培養(yǎng)基中。然后需要反復(fù)驗(yàn)證這些添加成分，保證它們能夠滿足以下三個(gè)要求：

2 維持淋巴細(xì)胞存活，保持細(xì)胞活力和免疫功能狀態(tài)；

2 不會(huì)額外刺激陰性細(xì)胞額外產(chǎn)生任何一種細(xì)胞因子；

2 不會(huì)抑制陽性細(xì)胞分泌各種細(xì)胞因子。

目前，我們同時(shí)提供U-CyTech原產(chǎn)的Lympho-Spot?無血清培養(yǎng)基和U-CyTech授權(quán)達(dá)科為在國內(nèi)生產(chǎn)的達(dá)優(yōu)?無血清培養(yǎng)基。它們的原料來源與質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)完全相同，能獲得同樣出色的檢測結(jié)果。由于物種的差異，部分添加成分在靈長類和嚙齒類之間有差別。U-CyTech公司采取了同時(shí)添加的策略，所以生產(chǎn)出的是通用達(dá)優(yōu)?無血清培養(yǎng)基；達(dá)科為公司采取的是分別添加的策略，所以生產(chǎn)出的是專用達(dá)優(yōu)?無血清培養(yǎng)基，分靈長類和嚙齒類兩個(gè)品種。詳細(xì)的差別見下表。

l 使用方法

達(dá)優(yōu)?無血清培養(yǎng)基的目的在于為檢測細(xì)胞提供一個(gè)不受血清干擾的培養(yǎng)環(huán)境。在細(xì)胞洗滌棄上清之后，用Lympho-Spot?無血清培養(yǎng)基重懸。之后做細(xì)胞計(jì)數(shù)，用Lympho-Spot?稀釋到需要的濃度，加入ELISPOT孔中即可。此外，刺激物好也用Lympho-Spot?溶解和稀釋。

l 無血清ELISPOT檢測的實(shí)際效果

達(dá)科為公司做了一系列的有、無血清ELISPOT檢測對(duì)比試驗(yàn)，并且在推廣ELISPOT技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化以及建立ELISPOT檢測的質(zhì)控系統(tǒng)時(shí)，都采用了無血清ELISPOT檢測技術(shù)。在所有的實(shí)驗(yàn)中達(dá)優(yōu)?都取得了優(yōu)于血清的結(jié)果。總結(jié)起來就是：背景更干凈，信噪比更高，頻率更穩(wěn)定，結(jié)果更真實(shí)。下圖5.1是一些實(shí)際案例。